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逆转录酶

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逆转录酶

Promega的反转录酶效果杠杠滴

  :有较强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适42℃。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍,然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。

  8. 对于反转录酶活性来说,二价阳离子是必需的。 对于大多数反转录反应,建议加入氯化镁至镁离子终浓度为2.5 mM 以得到最佳结果,可在1.5到5mM范围内调整优化。对于长片段 RNA 的反转录,可以降低镁离子浓度以提高延伸的完整性;短片段RNA的反转录,可以提高镁离子浓度以提高反转录的效率。

  GoScript ReverseTranscriptase:专为qPCR而设计,利用M-MLV和先进的缓冲液技术获得均衡稳定和可靠的cDNA合成结果,适合各种大小范围的低丰度和高丰度的转录子,即使存在抑制剂也不受影响。

  (表格引用Promega公司的 GoScript 反转录系统操作方法说明书)

  1. 逆转录PCR时,提取RNA是关键,需分离高质量RNA(纯度和完整性)。

  根据很多实验人员的经验反映,Promega的反转录酶效果杠杠滴,本人用过TaKaRa的,也是不错哒!大家可以根据自身情况进行选择。

  反转录引物有多种选择,Oligo(dT)随机引物、基因特异性引物(GSP)等。

  MMLV:有强的聚合酶活性,而RNA酶H活性较弱。较弱的RNA酶H活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。最适37℃。


点击次数:  更新时间:2019-09-17 00:52   【打印此页】  【关闭
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